chang liver人張氏肝細胞

【產(chǎn)品商標】ATCC
【供應(yīng)限制】僅供科研使用  
細胞培養(yǎng)的準備工作一定要做充分，準備至少兩套高溫高壓消毒后的物品，做新的操作時先檢點所有的東西是否準備齊全，比如配液時的濾器，分裝所用的容器是不是足夠等等。所有實驗物品，包括自己配的液體和購買的產(chǎn)品，都要標記清楚（比如名稱，PH值、時間、還有自己的名字，如果是共用一個冰箱的話這一點很重要）。凍存的物品盡量避免反復(fù)凍融，如果無法避免，也要盡早分裝，一次用完。細胞計數(shù)在開始培養(yǎng)時很有必要，但計數(shù)次數(shù)多了經(jīng)驗估計法也是很好的辦法，必竟每次計數(shù)也不是那么精確，而細胞培養(yǎng)對計數(shù)也不是那么要求嚴格。 一瓶細胞培養(yǎng)用液體盡量不要反復(fù)使用，這將增大污染機率。可用的辦法即是將其分裝成適當(dāng)規(guī)格，一次用1瓶。細胞培養(yǎng)板或瓶若要摞在一起的話，注意在箱內(nèi)不要超過3層，否則，中間的會受熱不均，嚴重影響細胞質(zhì)量，可造成細胞生長不均勻，可能造成中間稀少，四周密集。
本公司是一家生物企業(yè)，滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細胞生物學(xué)、免疫學(xué) ELISA試劑盒等生物科技實驗需求，其主營產(chǎn)品：ELISA試劑盒/人ELISA試劑盒/大鼠ELISA試劑盒/小鼠ELISA試劑盒/金標試劑盒/免疫組化試劑盒/標準品/科研抗體/生化試劑，生物培養(yǎng)基/細胞株/實驗室耗材/動物血清等科研產(chǎn)品！

chang liver人張氏肝細胞

1)培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決；2)細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決；3)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態(tài)和生長速度；4)對于生長不均的貼壁細胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細胞分布明顯不均時(即某一區(qū)域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白)，此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
細胞傳代注意事項：①傳代培養(yǎng)時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材；②每天觀察細胞形態(tài)，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代；③如發(fā)現(xiàn)細胞有污染跡象，應(yīng)立即采取措施，一般應(yīng)棄置污染的細胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。傳代細胞的建系和維持：細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現(xiàn)。對每一個細胞系來說都有其自身的特點，要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系的管理工作。培養(yǎng)細胞的凍存及復(fù)蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。
細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
細胞凍存的步驟：1)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)；2)去上清液，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細胞類型來選擇；3)將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))；4)將裝好細胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐；5)細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只凍存管細胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。