c3a細胞，肝癌細胞

注意事項如下:

一 、收到細胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

二、對于貼壁細胞，若細胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉;如細胞還不貼壁，將細胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

三、建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和本公司技術部溝通交流。

我們?nèi)娜鉃槟眨峁﹥?yōu)質(zhì)產(chǎn)品，保障售后服務，真心把客戶奉為上帝，及時處理客戶訂單，全程跟蹤貨源，采用誠信快遞運輸，認真解答客戶疑問，對客戶售后問題，不拖沓，不推卸責任，認真負責的態(tài)度。

停滯期(Stagnate Phase):細胞數(shù)量達飽和密度后，細胞遂停止增殖，進入停滯期。此時細胞數(shù)量不再增加，故也稱平頂期(Plateau)。停滯期細胞雖不增殖，但仍有代謝活動，繼而培養(yǎng)液中營養(yǎng)漸趨耗盡，代謝產(chǎn)物積累、pH降低。此時需做分離培養(yǎng)即傳代，否則細胞會中毒，發(fā)生形態(tài)改變，重則從底物脫落死亡，故傳代應越早越好。傳代過晚(已有中毒跡象)能影響下一代細胞的機能狀態(tài)。在這種情況下，雖進行了傳代，因細胞已受損，需要恢復，至少還要再傳1~2兩代，通過換液淘汰掉死細胞和使受損輕微的細胞得以恢復后，才能再用。結果反而耽誤了時間，這是在實驗中應特別注意的。

四、原代培養(yǎng):即*次培養(yǎng)，是指將培養(yǎng)物放置在體外生長環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng)，中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程。有幾方面含義:

培養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)器皿(瓶)中就不在分割，任其生長繁殖;

原代培養(yǎng)中的“代”并非細胞的“代”數(shù)，因為培養(yǎng)過程中細胞經(jīng)多次分裂已經(jīng)產(chǎn)生多代子細胞;

原代培養(yǎng)過程中不分割培養(yǎng)物不等于不更換培養(yǎng)液，也不等于不更換培養(yǎng)器皿。

正常細胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限，只有癌細胞和發(fā)生轉化的細胞才能無限生長下去。所謂轉化即是指正常細胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細胞。目前世界上許多實驗室所廣泛傳用的HeLa細胞系就是1951年從一位名叫Henrietta Lacks的婦女身上取下的宮頸癌細胞培養(yǎng)而成。此細胞系一直延用至今。

原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不易傳下去了，細胞的生長就會出現(xiàn)停滯，大部分細胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細胞一般能夠傳到40~50代，這種傳代細胞叫做細胞株。細胞株的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變,在培養(yǎng)過程中其特征始終保持。當細胞株傳至50代以后又會出現(xiàn)“危機”，不能再傳下去。但是有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，并且?guī)в邪┳兊奶攸c，有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。

c3a細胞，肝癌細胞

T-47D細胞，人乳腺管癌細胞

CCD-1095Sk細胞，人乳腺浸潤性導管癌旁皮膚細胞

SK-BR-3*細胞，人乳腺腺癌細胞

SW 1353細胞，人軟骨肉瘤細胞

GNM 細胞，人上頜牙齦癌頸淋巴結轉移癌細胞

T6細胞，人舌癌細胞

 TSCCA細胞，人舌鱗癌細胞

CAL 27細胞，人舌鱗癌細胞

Tca-8113細胞，人舌鱗癌細胞

TSCCa細胞，人舌鱗癌細胞

CRT 細胞，人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

U251細胞，人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

SH-SY5Y細胞，人神經(jīng)瘤細胞

BE(2)-M17細胞，人神經(jīng)母瘤細胞

CRL-2268細胞，人神經(jīng)母瘤細胞

IMR-32細胞，人神經(jīng)母瘤細胞

SH-5Y5Y細胞，人神經(jīng)母瘤細胞

SK-N-AS細胞，人神經(jīng)母瘤細胞

SK-N-BE(2)細胞，人神經(jīng)母瘤細胞

SK-N-MC細胞，人神經(jīng)上皮瘤細胞

A-498細胞，人腎癌細胞

A498-EGFP-puro細胞，人腎癌細胞

ACHN細胞，人腎癌細胞

KC細胞，人腎癌細胞

OS-RC-2細胞，人腎癌細胞

G-401細胞，人腎癌Wilms細胞

SK-NEP-1細胞，人腎母瘤細胞

SW-13細胞，人腎上腺皮質(zhì)癌細胞

NCI-H295R細胞，人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞

KP-N-NS細胞，人腎上腺神經(jīng)母瘤(腦轉移)細胞

NCI-H205細胞，人腎上腺腺瘤細胞

786-O(786-0)細胞，人腎透明癌細胞

CaKi-1細胞，人腎透明癌細胞

CaKi-2細胞，人腎透明癌細胞

786-0細胞，人腎透明腺癌細胞

ACHN細胞，人腎透明腺癌細胞

769-P細胞，人腎腺癌細胞

HuTu-80細胞，人十二脂腸腺癌細胞

CaES-17細胞，人食管癌細胞

EC9706細胞，人食管癌細胞

Eca-109細胞，人食管癌細胞

KYSE150細胞，人食管癌細胞

TE-1細胞，人食管癌細胞

原代培養(yǎng)是建立各種細胞系(株)必經(jīng)的階段，其是否成功與組織污染與否、供體年齡、培養(yǎng)技術和方法、適宜培養(yǎng)基的選擇等多種因素有關。由于原代培養(yǎng)的細胞轉化性極小，對病毒敏感性好，因此適應制備疫苗等生物制品;但也存在有潛在外源因子、不能事先檢查標本、且受供體年齡健康狀況的影響而導致批間差異大等缺陷。目前常用的原代細胞培養(yǎng)有雞胚成纖維細胞及豬腎、猴腎、地鼠腎等原代細胞。

原代培養(yǎng)的基本過程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種、加培養(yǎng)液、置培養(yǎng)條件下培養(yǎng)等步驟，在所有的操作過程中，都必須保持培養(yǎng)物及生長環(huán)境的無菌。

多數(shù)情況下，分散的細胞若屬于貼壁依賴型細胞，就能黏附、鋪展于培養(yǎng)器皿和載體表面生長而形成細胞單層，這種培養(yǎng)方式稱為單層細胞培養(yǎng)(monolayer culture)，又叫貼壁培養(yǎng)(adherent culture)。少數(shù)情況下，培養(yǎng)的細胞沒有貼壁依賴性，可通過專門設備使細胞始終處于懸狀態(tài)而在體外生長，這種形式稱為懸浮培養(yǎng)(suspension culture)。如何讓接種的細胞盡快貼壁，是決定培養(yǎng)成功的關鍵步驟:

取決于適當?shù)纳L基質(zhì)表面;

可降低接種后培養(yǎng)液對細胞的浮力，如先少補加少量培養(yǎng)液，待細胞貼壁后再補足營養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);

注意適當?shù)募毎臃N密度，一般10⁵個/ml左右。

五、傳代培養(yǎng):當原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂，一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。此時就需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi)，再進行培養(yǎng)。這個過程就稱為傳代(passage)或者再培養(yǎng)(subculture)。對單層培養(yǎng)而言，80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。

體外培養(yǎng)技術中所謂的傳“代”概念并不等于細胞生物學中“親代細胞”與“子代細胞”中“代”的概念。傳代培養(yǎng)的實質(zhì)就是分割后再一次培養(yǎng)，可以相對地衡量培養(yǎng)物的培養(yǎng)年齡。

六、生長曲線:細胞接種入培養(yǎng)瓶后，先進入2-24h的延遲期(lag period)，然后進入指數(shù)生長期(即對數(shù)期)(log phase)，匯合成單層進入緩慢生長或停滯期(即平臺期)(plateau lhase)。每種細胞系(cell line)的這些生長期(growth phase)都是特征性的，只要環(huán)境條件保持恒定，每一次測定結果應該是可重復的。