LX-2人肝星狀細胞

 【中文縮寫】    LX-2細胞
    【中文名稱】    LX-2(人肝星狀細胞)
    【背景資料】    見細胞說明書
    【產品來源】    細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系
    "公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性，一般細胞培養PBS量是10%，如果出現細胞狀態不良情況，可以提高PBS量到15%，待細胞穩定后，調回PBS量10%，對于初次實驗者，一般細胞培養，都需要加入雙抗防止細胞污染，細胞匯合度達到90%，我們開始寄送，這樣可以保持細胞收到時，良好的細胞活力。

復蘇細胞注意事項：
1收到細胞后當天換液，全部更換成客戶自己的新鮮培養基，放進培養箱，第二天再消化。
2邊觀察邊消化，根據細胞的形態，終止消化時間，采取以半分鐘間隔吹打細胞邊緣，如可吹打下來，即終止消化。客戶摸索比較好的消化時間。
3隨細胞有一份細胞操作說明書，請客戶仔細查看。
4記得加1%雙抗，降低被污染的概率。另外盡早凍存留種，以備后用。
5售后時間為一周，僅限于細胞本身的質量問題，而因乙方自己不當操作（不規范操作，消化過度，不加雙抗導致的污染等）導致的細胞問題不在售后范疇。
6收到細胞后，如細胞狀態不佳，或培養中遇到問題，煩請當天盡快聯系，以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據，請您務必重視。
7剛收到細胞時，胎牛血清可以用15%培養兩三天，利于細胞盡快恢復狀態，細胞狀態穩定后，再調回10%即可。
（其中1,2條針對于貼壁細胞，懸浮細胞詳情請見細胞操作說明書）"    P4
    【產品包裝】    復蘇T25培養瓶(一瓶)
    【產品規格】    1*10（6）
    【安全級別】    1
    【產品種屬】    人
    【組織來源】    肝
    【細胞形態】    上皮細胞樣
    【細胞特性】    貼壁

運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

細胞用途：僅供科研使用。               

培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備基礎培養基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優質胎牛血清，10%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

LX-2人肝星狀細胞

   "購買細胞注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，細胞了解細胞相關信息如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養過夜，隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

4. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通交流

細胞培養三不要：

養科研細胞是生物醫學研究的基本功。有三個小經驗可以和大家分享一下：

1. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養基怎么越用越發紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來。培養基中的碳酸少了，當然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發現培養液變堿的速度會大大減慢。（當然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內的溫度高）

其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發現根本就不會燒疼。如果有細菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內從來就不燒瓶口。來美國以后發現這里更*，超凈臺內根本就不點酒精燈。

2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言，養細胞就像養孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養不好，就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，細胞特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環境。你跑去看細胞，培養瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經常可以看到新手一天到晚都在看細胞，細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長。

3. 不要怕消化。在傳代的時候，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我師兄在做血管平滑肌原代的時候，37度消化過夜，細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有，動作要輕柔，盡量不要產生氣泡。

應力相當大，對細胞的傷害也是很大的。"    詳見細胞說明書

    傳代方法：    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    凍存條件：    詳見細胞說明書

    主要文獻：    請具體查閱相關發表文章

細胞培養三不要：

養科研細胞是生物醫學研究的基本功。有三個小經驗可以和大家分享一下：
1. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養基怎么越用越發紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來。培養基中的碳酸少了，當然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發現培養液變堿的速度會大大減慢。（當然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內的溫度高）
其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發現根本就不會燒疼。如果有細菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內從來就不燒瓶口。來美國以后發現這里更*，超凈臺內根本就不點酒精燈。
2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言，養細胞就像養孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養不好，就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，細胞系特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環境。你跑去看細胞，培養瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經常可以看到新手一天到晚都在看細胞，細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長。
3. 不要怕消化。在傳代的時候，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我師兄在做血管平滑肌原代的時候，37度消化過夜，細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有，動作要輕柔，盡量不要產生氣泡。應力相當大，對細胞的傷害也是很大的。