HCC15人肺癌細胞

培養(yǎng)條件：89%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗
凍存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基礎(chǔ)培養(yǎng)液
細胞質(zhì)檢情況：不含細菌、真菌、支原體等微生物污染
傳代建議：1:2~1:3傳代，2~3天換液1次
特別提醒：簽收細胞后，如細胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當(dāng)天盡快聯(lián)系，以便處理。當(dāng)天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請務(wù)必重視。
 
懸浮細胞接收后的操作流程與注意事項
1.如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室 
2.擰松瓶蓋，細胞瓶豎立培養(yǎng)8h（或過夜）
3.待細胞沉底后吸除上層液體（含碎片殘渣，請小心操作），然后吸取沉底的細胞層（2ML左右轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶，加入新鮮的*培養(yǎng)基（如細胞狀態(tài)較差可將血清濃度調(diào)高到15%）繼續(xù)培養(yǎng)
 
懸浮細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.將培養(yǎng)瓶/皿中的細胞重懸混勻
2.吸取2/3或者一半混勻后的細胞懸液到新的培養(yǎng)瓶/皿
3.分別在原瓶/皿和新分瓶的培養(yǎng)瓶/皿加入等量或者2倍的新鮮培養(yǎng)基，使細胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況和細胞密度，定期半量換液（每周2-3次），待細胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重復(fù)1項操作或者凍存

貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當(dāng)天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散
3.取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復(fù)1項作或者凍存

HCC15人肺癌細胞

注意事項：

1.動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因。
3.有時間的話，需要細胞計數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措。
3.要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，細胞房的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗。
4.個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，zui近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。
5.細胞房不能進去太多人，避免相互干擾。