GBC-SD人膽囊癌細胞系

細胞生長特性：貼壁生長
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞形態(tài)特性：上皮細胞樣

細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
復蘇技術更棒
細胞背景資料：細胞株是王展明等2000年從一位61歲的男性低分化膽囊癌患者中建立的。 細胞的形狀有多邊形、紡錘形和正方形。 分泌CEA和CA19-9。倍增時間大約為21.4小時。 可移植到裸鼠。 生成的腫瘤與原發(fā)腫瘤相似。
細胞培養(yǎng)溫度：維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細胞對培養(yǎng)溫度要求也不同。人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可能；當溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。相反，溫度不低于0℃時，對細胞代謝雖有影響，但并無傷害作用；把細胞放入25－35℃時，細胞仍能生存和生長，但速度減慢；放在4℃數(shù)小時后，再回到37℃培養(yǎng)，細胞仍能繼續(xù)生長。細胞代謝隨溫度降低而減慢。當溫度降至冰點以下時，細胞可因胞質(zhì)結冰受損而死亡。但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護劑(二甲亞砜或甘油)，可在深低溫下如－80℃或－196℃(液氮)長期保存。
細胞傳代方法：1：2傳代

GBC-SD人膽囊癌細胞系

 操作步驟：

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

 2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。     
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
    1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 注意事項：

1.動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因。
3.有時間的話，需要細胞計數(shù)，傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措。
3.要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，細胞房的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗。
4.個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，zui近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。
5.細胞房不能進去太多人，避免相互干擾。