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使用血清應該注意的事項

發布日期: 2019-09-09
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關于血清使用的幾點建議
1、 血清必須貯存-20℃,如存放于4℃,請勿超過兩周,對于某些單位一次無法用完一瓶,可在無菌條件下將其40-45ml分裝于無菌50ml離心管中(或血清瓶中),由于血清解凍時體積會增加10%,必須預留此膨脹體積的空間,否則易發生污染或容器凍裂的情形。


2、一般公司所提供的血清一般為200ml和500ml裝量,因此建議在使用中宜采取逐步解凍的方法解凍血清:-20℃→4℃冰箱或冷庫溶解24小時→室溫下全溶后再分裝,一般以50 ml無菌離心管中分裝40-45 ml。使用過程中要特別注意,必須規則地將血清搖晃均勻,小心勿造成氣泡,使溫度與成分均一,減少沉淀的發生。勿直接由-20℃放置至37℃環境下解凍,因為溫度改變太大,溶易造成蛋白質凝結而產生沉淀。

3、血清的滅活(heat-inactivation)一般是指56℃,30分鐘水浴加熱已*解凍的血清,加熱過程中必須規則地搖晃均勻。此處理的目的是使血清中的補體成分(complement)去活化。但是,經過滅活處理的血清會因而造成沉淀的顯著增多,且會影響血清的品質。所以,有的公司所生的細胞培養用牛血清不做滅活處理,由客戶自行選擇。而診斷試劑用血清在除菌過濾前進行過滅活處理。

4、在使用血清的時候,勿將血清留置于37℃太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分會因而受到破壞,影響血清的品質。

5一般我們在使用過程中是先過濾培養基,再加血清,勿直接過濾血清。

6、 血清的沉淀物
1. 凝絮物:其產生的原因有多種,但普遍的原因是血清中的脂蛋白(lipoprotein)變形及解凍后血清中存在的纖維蛋白(fibrin)造成,這些凝絮沉淀物不會影響血清本身的品質。除非必須,如果您想減少這些沉淀物,建議可用離心3000rpm,5min去除,或離心后取上清液加入培養基中一起除菌過濾。

2. 顯微鏡下觀察“小黑點”,通常經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為是血清遭受污染(如黑膠蟲),而將血清放置在37℃中欲培養此“微生物”,但37℃環境下,又會使此沉淀物增多,更會誤認為微生物的增殖,但以培養細菌的培養基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點不會影響細胞的生長。

血清質量的決定因素

1、 關于牛種
血清質量與牛種沒有必然的聯系,但有其先天條件。
首先,澳大利亞、新西蘭的牛源之所以被*,原因是這些國家的牛源是“無污染”的,“無污染”的實際含義是:病毒等外源因子污染較少。至于美國,由于其國內出現了瘋牛病,其形象由此受到挑戰。這種血清安全性的觀念在發達國家認知度較高,而在我國還不夠重視。
其次,牛所能獲得的營養 對血清質量有影響。在我國,由于飼養條件的不同, 不同地區產的血清質量是有差異的。

2、 質量標準件的問題
我國對人用生物制品生產所用的牛血清制定了國家標準,載于《中國生物制品主要原輔材料質控標準》2000年版,此標準已接近于國外胎牛血清的有關標準。內毒素:國家標準件為不高于10Eu/ml,內控標準件為不高5Eu/ml或10Eu/ml.國家標準之外的質控指標還有:免疫球蛋白、牛腹瀉病毒(BVDV)抗體、激素、和牛源安全性驗證等。

3、 牛血清的命名和選擇
一般公司對細胞培養用牛血清的命名分二類:胎牛血清和小牛血清。對于一般的細胞系,小牛血清可以培養的很好。

關于牛血清白蛋白的生產工藝

牛血清白蛋白的制備方法有Cohn′s法、鹽析法、熱變性法等多種工藝。不同的生產工藝其產品的名稱、質量指標、應用領域等各不相同。

其中Cohn′s法設備、工藝要求比較高,相對應的生產成本較高,但產品質量較好。牛血清組份V(FrationV)就是由Cohn′s法制備的。一般白蛋白純度96-99%、外觀潔白、結晶性狀好、1%蛋白水溶液PH7.0±0.2,再根據不同的應用分成低內毒素、低脂肪酸等等的不產品,主要應用于細胞培養領域的無血清培養基中。鹽析法因生產周期長,純度低和產品聚合體高、穩定性低等缺陷已很少應用。

目前國內應用比較普遍的是熱變性法,結合較先進的超濾生產工藝,其工藝要求相對較低,制備成本低,其缺點是目前應用領域比較單一,僅供免疫診斷試劑使用。

 

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